一步法荧光定量耐热反转录PCR试剂盒

产品名称：ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit

英文名称：ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit

产品编号：TK08045

产品包装规格：50 µl反应× 100次

储存条件及有效期：试剂盒于-20℃避光保存，有效期12个月。

ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit 产品描述：

本试剂盒是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行One Step qRT-PCR的试剂。使用本试剂盒进行qRT-PCR反应可在同一反应管内连续进行，操作简单，并能有效防止污染。本反应体系由于可以对扩增产物进行实时检测，大大提高了检测的灵敏度，并省略了PCR反应后电泳的步骤，非常适合微量RNA的检测。

ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit 产品特点：

本产品中使用了于qRT-PCR的反转录酶ToneScript RTase和抗体修饰的具有高效扩增效率的Hot Start Taq Polymerase，能进行稳定的One Step qRT-PCR反应，可以快速、准确地对RNA病毒等微量RNA进行分析。本品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对靶基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。

准备材料：

实时荧光定量PCR仪、RNA模板、PCR引物、移液器枪头。

注意事项：

1、根据不同的荧光定量PCR系统来决定ROX Reference Dye的使用。

2、当有多个样品进行反应时，应先配制各种试剂的混合液，然后再分装到每个反应管中，可使所取试剂体积准确，避免同一试剂多次吸取造成浪费，同时也减少每个样品之间的误差。

3、使用ToneScript One Step Enzyme Mix时应轻轻混匀，避免起泡，吸取应请短暂离心，将试剂收集到管底部，同时由于含有甘油，所以应缓慢吸取，并且枪头不宜插入液面过深，造成损失。

4、2×One Step SYBR qRT-PCR buffer溶解后要充分混合，使用Vortex等振荡*溶解后使用。

5、本制品中使用的 Hot Start Taq Polymerase是用Taq抗体修饰的 Hot Start 高效DNA聚合酶，与化学修饰型的 Hot Start DNA聚合酶相比，不需要PCR反应前的95℃，5-10 min的预变性，高温处理时间过长，会使酶的活性下降，其PCR扩增效率和定量准确度都会受到影响。

6、本产品只能用基因特异反转录引物，不能使用Random Primer和Oligo dT Primer等进行反转录反应。

RNA模板制备注意事项

RNA模板可以采用总RNA或mRNA。本试剂盒将RNA反转录成cDNA，然后对cDNA进行扩增，RNA的纯度会影响cDNA的合成量，制备RNA的关键是要抑制细胞中和环境中的RNase，防止RNA降解。因此，在实验中戴一次性手套，使用RNA实验台，实验中避免讲话等。相关实验耗材应用0.1%DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃处理12 h，并高压灭菌30 min后使用。