Bradford法蛋白定量试剂盒

Bradford Protein Assay Kit

货号：PD-Cog-1000

组分：1000毫升染色液一瓶，5 mg/ml BSA四支。

保存：4度避光，密封保存，一年有效。

试剂盒原理：

在酸性环境中，蛋白质结合考马斯亮蓝G250染料，导致染料的maximal吸收发生位移，从红棕色形式（maximal吸收峰 465nm）转化为蓝色形式（maximal吸收峰 610nm）。这两种形式在 595nm 处光吸收差异maximal，因此 595nm 是测定考马斯染料-蛋白复合物的蓝色的best波长。基于考马斯染料的蛋白质检测法中，颜色的形成是与某些碱性氨基酸有关，范德华力和疏水相互作用也影响染料-蛋白质的结合。结合到每个蛋白质分子上的考马斯染料分子数大致与蛋白所带正电荷的数量成正比。游离氨基酸、肽和低分子量蛋白质不会与考马斯染料试剂产生颜色，肽或蛋白质的分子量必须大于 3,000 道尔顿才能被检出。

与BCA法和Lowry法相比，Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，尤其是还原试剂的影响，但是受去垢剂的影响较大。常见物质的兼容性参考兼容物列表。

使用Bradford法蛋白定量试剂盒检测BSA蛋白时，线性拟合范围可低达约30 μg/ml，即相当于0.15 μg的BSA蛋白，检测浓度上限可达到5 mg/ml以上，主要受读数所用仪器的检测范围限制。不同蛋白由于氨基酸组成不同，与染料结合后的吸光值有差异，线性范围会有所变动。由于染料与蛋白结合前后的吸收光谱有重叠，因此直接使用OD595（在595 nm的光吸收值）线性拟合，得到的是一个直径很大的曲线，可近似看作直线，在蛋白的浓度跨度较大时，线性度下降。使用OD595/OD470的比值（在595 nm和470 nm的光吸收值之比）能更好地拟合反应过程，得到的是一条直线，可在一定程度上提高检测灵敏度。

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