导读：如果不用液氮罐，可以用-70。我们是这样做的，将细胞转移至冻存管中，在-20放置半小时到一小时左右，预冻。之后放入-70中，我们尝试过载-70中放置1年的细胞没有问题，复苏之后状态尚佳。至于更长时间我们没有尝试过，但是老板说1年半没问题，在国外他试过。

    如果不用液氮罐，可以用-70。我们是这样做的，将细胞转移至冻存管中，在-20放置半小时到一小时左右，预冻。之后放入-70中，我们尝试过载-70中放置1年的细胞没有问题，复苏之后状态尚佳。至于更长时间我们没有尝试过，但是老板说1年半没问题，在国外他试过。

细胞冻遵循：慢冻速溶的原则。

    还可以拿毛巾包着冻存管就可以直接放进-70，即可以遵循细胞冻慢冻速溶的原则，又比较方便，不用先放-20，因为是慢慢冻进去的，所以能更好的达到梯度冻存。

实际上，我认为慢冻速溶原则是正确的。
慢冻是要给DMSO以渗透入细胞的时间，所以我的经验是4度的半小时要保证，之后就基本上可以马上冻起来也没有什么关系了。
毛巾包裹法十分新颖，呵呵。不过，从原理上看，确实是值得尝试的好方法，既保证了时间，又省去了搬来搬去的麻烦。
至于-80度的保存时间，我亲眼所见，半年没有问题。

在４度的情况下，要看你是什么细胞了，如果是老鼠的细胞可以放１小时左右，其他细胞zui多半小时（本人做过试验的）；在-２０度的情况下，老鼠的可以放１天左右，其他细胞半天，但其状态不是很好了；在-７０度的情况下，老鼠的细胞可以放１到２年，在此期间要复苏一次看其生长情况，其他细胞zui多一年了！

1. 选用对数生*细胞，在收集细胞24小时前换液一次。
2. 用常规方法将细胞消化下来，按（1～5）×106/ml浓度、悬浮于含有10％ DMSO的小牛血清或生长液中。冻存的细胞数量要充分，因复苏时接种的细胞数量应比平常多一些。
3. 用吸管吸取细胞悬液，分装于无菌安培管中(没管1ml)，严密封口，放入三层纱布小袋，注明细胞名称和冻存时间，便于以后查找。
4. 冻存 当前已有细胞冻存器，能地控制冻存温度。在无冻存器的情况下，可用手工方法。从把安培悬液在液氮容器口开始，在30～40min内，下降到液氮表面，在停30min后，直接投入液氮中。或先将安培移入液氮罐口颈部气相中过夜，次日将纱布袋缓慢下降至液氮中，历时3分钟。在液氮中可*保存。 若没有液氮，可存于-80冰箱内，不过注意保存时间，比液氮短，可保存3个月左右。