上海笃玛生物科技有限公司多克隆抗体供应说明：兔抗人BCL2相关athanogene4多克隆抗体

英文名称：Rabbit anti-human BCL2-associated athanogene 4 polyclonal Antibody

笃玛生物兔抗人BCL2相关athanogene4多克隆抗体
抗体原理
ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。

操作步骤

方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法：
包被：用0.05M PH9.6 碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
5%脱脂乳（SMP）或者BSA 37℃（或者RT封闭）封闭1小时。弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。
3. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
4. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
5. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
6. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
7. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
方法二 用于检测未知抗体的间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml， 每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。
加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔 中,置37℃孵育1小时,洗涤。
同时做空白、阴性及阳性孔对照于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml， 37℃孵育30-60分钟，洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

试剂器材

1. 试剂
(1) 包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液): Na?CO3 1.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸馏水至1000ml
(2) 洗涤缓冲液(PH7.4 PBS)：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl 8.0克 KCl 0.2克 Tween-20 0.05% 0.5ml 加蒸馏水至1000ml
(3)稀释液：牛血清白蛋白(BSA) 0.1克 加洗涤缓冲液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。
(4) 终止液(2M H2SO4）： 蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。
(5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸枣柠檬酸): 0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml 0.1M 柠檬酸(19.2克/L) 24.3ml 加蒸馏水50ml。
(6) TMB(四甲基联苯胺)使用液: TMB(10mg/5ml无水乙醇) 0.5ml 底物缓冲液(PH5.5) 10ml 0.75%H2O2 32μl(7) ABTS使用液: ABTS 0.5mg 底物缓冲液(PH5.5) 1ml 3%H2O2 2μl
(8)抗原、抗体和酶标记抗体。
(9) 正常人血清和阳性对照血清。

2. 器材:
(1) 聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。
(2) 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。 (3) 4℃冰箱，37℃孵育箱。

上海笃玛生物科技有限公司供应产品信息

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DMD0798    大鼠碳酸酐酶(CA)ELISA试剂盒    96T/48T
DMD0799    大鼠降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA试剂盒    96T/48T
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