T-2毒素ELISA检测试剂盒_美国REAGEN货号RNM 98002    T2毒素检测试剂盒    T2 Toxin ELISA Test Kit    96T    美国REAGEN T-2毒素检测试剂盒是用竞争性酶联免疫的方法定量分析谷类、饲料、干肉、干鱼、种子、牛奶中T-2毒素，齐一生物科技欢迎您订购咨询.手机.在线咨询:1091367877

1T-2毒素ELISA检测试剂盒_美国REAGEN．试剂盒描述

REAGEN^™T-2毒素检测试剂盒是用竞争性酶联免疫的方法定量分析谷类、饲料、干肉、干鱼、种子、牛奶中T-2毒素，该试剂盒有以下特点

• 高回收率（75-115%），快速（10-20min），成本低
• 高灵敏度（1ppb）
• 高重复性。
• 检测过程只需要不到1小时。

2．试剂盒原理

REAGEN^™T-2毒素检测试剂盒基于竞争性酶联免疫检测原理，毒素抗原包被在酶标板孔内，分析过程中，样品和一抗、酶标二抗加入微孔中，如果样品中有毒素抗原，就可竞争与抗体结合，阻止抗体与包被的抗原结合，酶标二抗可与一抗结合从而于酶标板上包被的抗原结合。经酶催化底物发生反应颜色变化，颜色的深浅与目标物的浓度成反比。

3. 试剂盒组成部分和储存

已包被抗原的酶标板(T-2 Toxin Coated Plate)（可拆式）             12×8 孔

标准液(Standards)（0，1，5，10，25，50 ppb）                      6×1.0mL

回收用100ng/ml(Spiking)(可选）                                   1×1.0ml

一抗(T-2 Toxin Antibody #1)                                       1×8ml

1×HRP酶标二抗(HRP-Conjugated Antibody #2)                        1×8ml

20×浓缩洗液(Wash Solution)                                       1×30mL

终止液(Stop Buffer)                                               1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                           1×10mL

本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过1个月不使用试剂盒，请将标准品、一抗、二抗于-20°C保存。

4.检测下限

5.交叉反应：

6．未提供的设备或材料

• 酶标仪(450nm)
• 匀浆器
• 漩涡振荡器
• 移液器(10、20和100mL，1mL各一支)
• 多道移液器（50-300mL）
• 甲醇
• 乙酸乙酯

7.注意事项

实验前请阅读以下文字，以保证获得实验效果。

• 标准品中含有T-2毒素，请小心使用。
• 不要使用过期的试剂盒。
• 不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。
• 尽量保持室温（22.5±2.5）°C，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

• 水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。
• 加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。
• 孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的*性，先添加标准品后添加样品。
• 从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。
• 将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。
• 确保洗板正确，洗板充分。

8．样品的准备

所有的试剂在使用之前应将其回温室温，并在使用试剂前摇动几下，以保证合理的浓度。

干肉/鱼/谷物/饲料/种子

快速提取方法

• 研磨并混匀适量的样品；
• 称取5g磨碎的样品，放入适当的容器中；
• 加入25mL70%甲醇，用手或者振荡器剧烈振荡20分钟；
• 室温（22.5±2.5）°C下4000 rpm离心10分钟；
• 取1mL上清液，加入1mL蒸馏水或者去离子水稀释；
• 取50μL作检测。

稀释倍数：10

备注：如果需要，样品所取的量可以增加，同时甲醇/水的用量也必须作相应的改变。例如取10g样品，应该加入50mL70%甲醇。

    有机提取方法(针对高背景值样品或用快速提取回收率低的样品)

• 取适量样品用匀浆器匀浆；
• 称取2g样品；
• 加入500mg NaCL,6ml乙酸乙酯，涡流1分钟或振荡10分钟；
• 室温（22.5±2.5）°C 4000rpm离心10分钟。
• 移取1ml上清液到新的试管中，60°C 水浴下氮气吹干。
• 取333μL35%的甲醇溶解干燥物，加入1ml正己烷，涡流一分钟。
• 室温（22.5±2.5）°C 4000rpm离心10分钟。
• 弃去上层液，每孔取50μL下层液用于检测。

稀释倍数：1

牛奶

• 脱脂牛奶：用35%甲醇做10倍稀释（20mL牛奶+180mL 35%甲醇），每孔取50mL用于检测。
• 含脂牛奶：使用前需要室温（22.5±2.5）°C 下以4000rpm离心5分钟除去上层脂肪层，再用35%甲醇做10倍稀释（20mL牛奶+180mL 35%甲醇），每孔取50mL用于检测。

       稀释倍数：10

9．酶联免疫反应测试步骤

试剂准备：

注意：试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中，处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。

1x洗液的制备

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合

检测：

以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

• 加入50mL的标准品于所设定的孔中。
• 加入50mL的样品于所设定的孔中。
• 每孔加入50mL 1×二抗然后再加入50mL一抗，震荡混匀1分钟。
• 室温（22.5±2.5）°C下避光孵育30分钟。
• 300mL 1×洗液洗板3次，zui后一次洗板后，将酶标板倒置用力甩干。
• 加入100mL TMB底物，混匀1分钟。

• 室温（22.5±2.5）°C避光孵育15分钟，加入100mL终止液。
• 450nm下读数(读数前，用无绒布擦拭除去微孔底部的水分和指痕)。需辅导欢迎