纤维素含量测定中样本如何处理及注意事项-齐一生物
时间:2021-06-28 阅读:3098
我司有提供植物纤维素类测定试剂盒、比如木质素含量、半纤维素含量、纤维素含量试剂盒和代测试服务,同时我司也提供木质素单体高效液相色谱法代测服务,纤维素类测定、木质素含量和半纤维素含量测定都是样品 80℃烘干至恒重,粉碎,过 40 目筛即可,但是纤维素含量测试样本处理比较麻烦,特在此标注一下植物纤维素含量测定样本前处理的操作步骤如下:
1、 细胞壁的提取:取约 0.3g 样本(计为m1),加入 1mL 80%乙醇,室温快速匀浆,95℃水浴 20min(加热过程中EP管可能爆开,建议用胶带封口或使用防爆EP管),冷却至室温,4000g 25℃离心 10min,弃上清。沉淀加入 1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(涡旋振荡 2min 左右,4000g 25℃离心 10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入 1mL 试剂一(去除淀粉)浸泡 15 小时,4000g 25℃离心 10min,弃上清,1mL 80%乙醇洗涤两次,弃上清,将沉淀干燥,称重得细胞壁物质(CWM质量计为m2)。
2、 纤维素的提取:称取烘干的 CWM 约 5mg(计为W),加入 0.5mL 蒸馏水充分匀浆,匀浆液转移至 EP 管中,用蒸馏水定容至 0.5mL,置于冰水浴中,缓慢加入 0.75mL 浓硫酸,混匀,冰水浴中静置 30min。8000g 4℃离心 10min,取上清液,用蒸馏水稀释 20 倍后待测。
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