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蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色谱法代测详解-齐一生物

时间:2020-09-01      阅读:5787

氨基酸是含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的基本组成单位,是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物。氨基连在α-碳上的为α-氨基酸。组成蛋白质的氨基酸均为α-氨基酸。
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色谱法测定原理:
大多数蛋氨酸(甲硫氨酸)本身不能发射荧光,又不具有紫外吸收的特性,需要制成某初中形式的衍生物后才能检测。本说明书中运用蛋氨酸(甲硫氨酸)与 PITC 柱前衍生,紫外检测器 254nm 波长下检测 。
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色谱法 试剂的组成和配制: 
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色谱法实验前的准备工作:
蛋氨酸(甲硫氨酸)的提取:
(1)游离蛋氨酸(甲硫氨酸)的提取:
(2)结合态蛋氨酸(甲硫氨酸)提取:
蛋氨酸(甲硫氨酸)的衍生:
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量测定操作步骤:
1、 开启电脑、检测器和泵,安装上色谱柱,打开软件,在方法组中设置进样量,设置完毕保存方法组。
2、 用流动相过柱子,待基线稳定后开始加样。
3、 加入标准品,分离蛋氨酸(甲硫氨酸),(柱子不同,保留时间有差异)。
4、 加入样品 ,在相应保留时间处检测蛋氨酸(甲硫氨酸)的峰面积。
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色谱法含量的计算:
样本溶液中各种蛋氨酸(甲硫氨酸)浓度(ug/mL)=f1/f2*C F1=样本溶液中个蛋氨酸(甲硫氨酸)峰面积/内标峰面积
F2=混合蛋氨酸(甲硫氨酸)标准品溶液中各蛋氨酸(甲硫氨酸)峰面积/内标峰面积  C=混合蛋氨酸(甲硫氨酸)标准品中个蛋氨酸(甲硫氨酸)浓度
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色谱法注意事项:
1、 为了避免使用过程中柱压变化过大,流速由小到大调节。
2、 使用完毕后,需用纯乙腈冲洗柱子 30min,防止无机盐结晶堵塞色谱柱。
3、 在仪器操作过程中,要时刻注意柱压的变化,防止柱压过高,损害仪器。

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