拓纷冻干机：微生物菌种如何真空冷冻干燥保存

①准备安培管 

   用于真空冷冻菌种保藏的安培管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安培管。大小要求外径6～7.5mm，长105 mm，球部直径9～11 mm，壁厚0.6～1.2 mm，也可用没有球部的管

②准备菌种 

   用真空冷冻干燥法保藏的菌种保藏期可长达几年甚至几十年，为了不出现差错，所用菌种纯度要高，而且菌龄要适宜。细菌和酵母菌的菌龄要求超过对数生长时间，若用对数生长时间的菌种进行保藏，其存活期反而降低。一般细菌的菌龄要求24～48h；酵母菌为3d；形成孢子的微生物则宜保藏孢子；放线菌和丝状真菌菌龄为7～10d。

③制备菌悬液与分装 

   以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2mL左右加入试管中，制成浓菌液，每支安培管分装0.2mL。

状安培管。塞好棉塞，在压力0.11MPa，温度121℃条件下灭菌30min后备用。

④冷冻 

   微生物菌种用冻干机，上海拓纷有成套的装置出售，可直接真空冷冻干燥（直接在冻干机内原位干燥，④和⑤步骤结合）。

   此处介绍的是简易的方法与装置，可达到同样的目的。
⑤真空干燥 

   为在真空干燥时使样品保持冻结状态，需准备冷冻槽，槽内放碎冰和食盐，混合均匀，可冷至－15℃。安培瓶冷冻槽的干燥瓶内。

⑥抽气 

   一般若在30min内能达到93.3Pa（0.7mmHg）真空度时，则干燥物不致溶化，以后继续抽气，几小时内，肉眼可观察到被干燥物以趋干燥，一般抽到真空度26.7Pa（0.2mmHg），保持压力6~7h即可。

⑦封口 

   抽真空干燥后，取出安培瓶，接在封口用的玻璃管上，可用L形五通管继续抽气，约10min即可达到26.7Pa（0.2mmHg）。于真空状态下，以煤气喷灯的细火焰在安培管颈中央进行封口。封口以后，保存于冰箱或室温暗处。

   此法为菌种保藏方法中zui有效的方法之一，对一般生活力强的微生物及其孢子都适用，即使对一些很难保存的致病菌，如脑膜炎球与淋病球菌等亦能保存。此法适用于菌种的长时间保存，一般可保存数年至几十年。

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