超声波工艺提炼红茶多糖技术和低血糖活性探讨
时间：2013-01-07 阅读：1632
1材料与方法1.1材料与仪器材料：铁观音，安溪茶叶市场购买。
主要仪器：SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；B-490旋转蒸发仪（郑州长城科基金项目：华侨大学引进人才启动项目（09B0054）。
工贸有限公司）；756型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；KQ5200DE超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）主要试剂：可溶性淀粉、十二水合磷酸氢二钠、一水合柠檬酸、无水乙醇、碘、碘化钾、氯化氢，以上均为分析纯；α-淀粉酶（2000U/g）。
1.2试验方法1.2.1茶多糖的提取方法准确称取10g样品于烧杯中，加入蒸馏水进行超声波处理，随即离心（4800r/min）10min，上清液转移到布氏漏斗中抽滤，滤渣放入原烧杯中，加入同样量的蒸馏水，按照之前的条件再超声1次，离心（4800r/min）10min，合并2次滤液，将滤液置于圆底烧瓶中，旋转蒸发浓缩至原体积的20，加入无水乙醇沉淀，冰箱中静置沉淀24h，离心（4000r/min）15min，转移到三角漏斗中真空抽滤得到沉淀，干燥得茶多糖。
1.2.2单因素试验分别考察超声时间20、30、40、50、60min，超声功率120、140、160、180、200W，超声温度20、30、40、50、60℃，料水比（g：mL）1：10、1：20、1：30、1：40、1：50对乌龙茶多糖活性的影响，其他因素均取中间水平。
1.2.3正交试验以单因素试验结果为基础，选用正交设计表L9（34）（），以茶多糖对α-淀粉酶活性抑制率为指标，对超声波法提取乌龙茶多糖的工艺条件进行优化。
1.2.4茶多糖对α-淀粉酶活性抑制率的测定方法吸取可溶性淀粉溶液20mL、pH6.0的磷酸缓冲液5mL、1mL茶多糖溶液和1mL待测酶液于试管中，摇匀于60℃准确反应5min.立即吸取反应液1mL，加到预先盛有0.5mL盐酸（0.1mol/L）和5mL稀碘液的试管中，摇匀。以蒸馏水代替淀粉溶液作试剂空白调零。
660nm处用10mm比色皿迅速测定其吸光度（A）。
茶多糖对酶活抑制效果计算公式为：PE=（C0-C1）VE/CV………………………………（1）式中：PE为茶多糖对α-淀粉酶酶活的抑制效果（U/mg多糖），C0为未加茶多糖的酶液中α-淀粉酶的原始浓度（U/mL），C1为经茶多糖抑制后的酶液中α-淀粉酶的浓度（U/mL），C1由测得的反应液吸光度A据“吸光度A-酶浓度C”附录表查得；VE为所取稀释酶液的体积（mL），此研究取1mL；C为多糖溶液中茶多糖浓度（mg/mL）；V为加入酶液的多糖溶液的体积（mL）。
PER=PEC0VE×100…………………………（2）式中：PER为每毫克茶多糖对α-淀粉酶酶活抑制率（），其余同上式。
2结果与分析2.1超声时间对乌龙茶多糖活性的影响在料水比1┱30、超声温度40℃、超声功率160W条件下，超声处理20、30、40、50、60min乌龙茶多糖活性如所示。结果表明，随着超声作用时间增加，茶多糖对α-淀粉酶活性抑制率增大，处理时间超过40min后茶多糖活性反而下降，超声波空化效应产生的大气压撞击力长时间作用可能会使大分子多糖断裂，从而影响了乌龙茶多糖的活性，因此超声作用时间选择40min为宜。
2.2超声功率对乌龙茶多糖活性的影响固定料水比1：30、超声时间40min、超声温度40℃，分别考察超声功率120、140、160、180、200W条件下乌龙茶多糖活性（）。可以看出，改变其超声功率对茶多糖的活性有一定的影响，120180W范围内茶多糖对α-淀粉酶活性抑制率随超声功率加强而增大，当功率超过180W时乌龙茶多糖活性反而下降，可能是超声功率强度过大，多糖结构发生改变导致活性降低，因此超声功率宜采用180W.
2.3超声温度对乌龙茶多糖活性的影响在超声功率160W、超声时间40min、料水比1：30条件下，考察超声温度20、30、40、50、60℃对乌龙茶多水平123因素A料水比/（g：mL）1┱301┱401┱50B超声时间/min304050C超声功率/W160180200D超声温度/℃304050糖活性的影响。茶多糖对α-淀粉酶活性抑制率随着温度升高增大，多糖活性可能受得率限制，在30℃时达到zui大，其后多糖活性随之增高而降低，茶多糖在高温下容易失活，因此微波处理温度采用30℃为宜。
2.4料水比对乌龙茶多糖活性的影响固定超声温度40℃、超声时间40min、超声功率160W，分别考察料水比1：20、1：30、1：40、1：50、1：60条件下乌龙茶多糖活性，结果。可以看出茶多糖对α-淀粉酶活性抑制率随着料水比的增加而增大，在料水比为1：40时乌龙茶多糖活性zui大，当料水比大于1：40活性随之略微降低，因此1：40为zui适料水比。
2.5正交试验极差分析和方差分析表明，以茶多糖对α-淀粉酶活性抑制率为指标，各因素影响顺序依次为：超声温度>超声功率>料水比>超声时间，各因素均对乌龙茶多糖活性有极显著性影响（3）。极差分析得乌龙茶多糖提取*工艺为超声温度30℃、超声功率180W、料水比1：40、超声时间40min26.18，支持工艺条件优化结果。
3结论在超声波技术提取乌龙茶多糖工艺中，以茶多糖对α-淀粉酶活性抑制率为指标，各因素影响大小顺序为：超声温度>超声功率>料水比>超声时间，4个因素对茶多糖活性都有极显著性影响；*提取工艺为超声温度30℃、超声功率180W、料水比1：40、超声时间40min，此条件下乌龙茶多糖对α-淀粉酶活性的抑制率为26.18.
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该研究系统研究提取工艺条件对乌龙茶多糖药理活性的影响，这对于有效开发利用植物资源提供了一条全新的思路，突破了目前研究集中于工艺条件对活性物质得率影响的局限，对于提高保健产品的品质和疗效具有推动作用。