酸性磷酸酶检测试剂盒加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样品稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

温育：操作同 3。

洗涤：操作同 5。

显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.

终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。