PCR( Polymerase Chain Reaction)-聚合酶链式反应，可以选择性扩增一段DNA序列。其基本步骤是，首先将待扩增的模板DNA变性使之成为单链，DNA样品中，特异性的引物能够与其互补的序列杂交，在dNTPs和Taq酶存在时，就可以合成模板DNA的互补链，反应完成后，将反应混合物加热使DNA双链变性，温度下降后，过量的引物又可以开始第二轮的合成反应。这种延伸-变性-退火-延伸的循环可以重复多次，使所需要的DNA片段得到特异性的扩增。PCR反应在生物体外大量扩增特定DNA片段的分子生物学技术，其特点是可以以微量的DNA为模板，快速扩增得到大量拷贝。

一、PCR反应条件的控制：
1.  PCR反应的缓冲液提供合适的酸碱度与某些离子 。 
2.  镁离子浓度 总量应比dNTPs的浓度高，常用1.5 mmol/L。　
3.  底物浓度dNTP以等摩尔浓度配制，20～200 umol/L。　
4.  TaqDNA聚合酶2.5U(100 ul）。　　
5.  引物 浓度一般为0.1 ～0.5 umol/L。
6.  反应温度
（1）变性温度和时间95℃，30 s。
（2）退火温度和时间 低于引物Tm值5 ℃左右，一般在45～55℃。
（3）延伸温度和时间72℃，1 min/kb(10 kb内）。
（4）Tm值=4(G+C) +2(A+T)
7.  循环次数 ：一般为25 ～30次。循环数决定PCR扩增的产量。模板初始浓度低，可增加循环数以便达到有效的 扩增量。但循环数并不是可以无限增加的。一般循环数为30个左右，循环数超过30个以后，DNA聚合酶活性逐渐达到饱和，产物的量不再随循环数的增加而增加，出现了所谓的“平台期”。

二、PCR的循环参数：
1.  预变性（Initial denaturation）
模板DNA全变性与PCR酶的全激活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。

2.  循环中的变性步骤
循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列全变性，可能的情况下可 缩短该步骤时间，变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻di，易造成扩增失败。

3.  引物退火（Primer annealing）
退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。
 

4.  引物延伸
引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000 bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1 min/kbp。

5.  循环数
大多数PCR含25-40循环，过多易产生非特异扩增。

6.  最后延伸
在最后一个循环后，反应在72℃维持5-15分钟．使引物延伸全，并使单链产物退火成双链。