酶联免疫吸附测定（ELISA）是应用广泛的免疫测定类型。 ELISA 是一种快速测试，用于检测样品中抗原或抗体的存在和数量。小鼠ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结如下：

一、选择试剂

选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。

二、加样

可能原因：

1)血清或血浆标本分离不好即进行加样; 2)手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。

解决办法：

1，标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟;若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。

2，加样后及时放入孵箱。

3，加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

4，如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。

5，ELISA试剂盒标本较多时，请分批操作。

三、 孵育

可能原因：

1，孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗che底;

2，孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗che底。

解决办法：

1，贴封片或加盖;

2，按说明步骤严格控制操作时间。

四、洗板

可能原因：

1，采用手工洗板，孔与孔之间液体交叉。

2，采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不che底;洗板针堵塞，抽吸不wan全;洗板不畅，导致洗板效果差。

3，反应板过多造成洗板等待时间长。

解决办法：

1，ELISA试剂盒保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后zui hao在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;

2，合理安排，或多用几台洗板机。