鸡白介素4（IL-4）ELISA测定试剂盒      

规格：48T/96T定量定性检测
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鸡白介素4（IL-4）ELISA测定试剂盒 组成及试剂配制
1.  酶联板：一块（96孔）
2.  标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1,600 pg/ml，将其稀释为400 pg/ml后，再做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别稀释成400 pg/ml，200 pg/ml，100 pg/ml，50 pg/ml，25 pg/ml，12.5 pg/ml，6.25 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。如配制200 pg/ml标准品：取0.5ml （不要少于0.5ml ） 400 pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.  样品稀释液：1×20ml。
4.  检测稀释液A：1×10ml。
5.  检测稀释液B：1×10ml。
6.  检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7.  检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。
8.  底物溶液：1×10ml/瓶。
9.  浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
11. 覆膜：5张
12. 使用说明书：1份

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 酶标仪判读结果
◎显色反应终止后应立刻比色（30分钟内）。
       常见的显色系统有OPD和TMB二种，以后者zui为常见，而TMB酸不易终止因此必须尽快比色以免影响结果。OPD终止后显棕色，测定波长为490nm；
     TMB终止后显黄色，测定波长为450nm，
        二种底物的校正波长均用630nm。
        使用双波长的优点可以消除反应板条上的划痕手印的干扰。同时要注意反应板应用纸吸干后才能置酶标仪中比色，否则吸光度易出现负值或损坏滤光片。
报告方式
◎定性试验 国内外为便于统一计算，一律按S/C.O方式报告，S为标本A值，C.O即Cut Off值（阳性判定值）
◎夹心法和间接法以S/C.O≥1为阳性；
     竟争法与中和法以S/C.O﹤1为阳性
◎Cut Off的计算公式以试剂盒说明书的为准常见的有：
◎A）  C.O=2.1×N（当N不足0.05时按0.05计），
◎此公式由P/N>2.1换算而来，常用于夹心法。
◎B） C.O=0.5×N，从抑止率公式换算而来，
◎常用于竟争，中和法
◎C） C.O=N+C（C为常数），用于间接法。
◎D）    C.O=C×P+N（C为常数），用于间接法。此公式zui客观，但对生产厂家要求很高，阴阳性对照测定值要基本恒定。
报告方式
定量分析  用已知量的标准品作一系列稀释，ELISA测定，绘制标准曲线，结果以量或单位表示。
ELISA的标准曲线每次都要和待测标本做在同一块板上。
◎现有的ELISA定量试剂盒标准曲线只有在较窄的浓度范围内成直线，要得到精确的结果实属不易。
因此严禁用定性试剂盒做定量分析。

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