目的：建立一套适用的培养操作规程，进行无污染条件下体外细胞扩大培养。

主体内容：

操作步骤：

1、紫外灯照射超净工作台30分钟（根据实际情况，可适当延长或缩短照射时间，但时间长一点总比时间短一点安全。）

2、将培养液、PBS、胰酶放在37℃水浴中温育（每次用多少，温育多少，这样既可节约温育的时间，又可延长药品的使用期限。）

3、超净工作台照射30分钟后，关闭紫外，打开照明，打开排风10分钟后再次进入细胞培养室。（注意：要打开排风10分钟后再进行操作，这样才能保证循环的风是无菌的。同时还会避免有菌的风直接吹到人的呼吸道中，对人体也有一定的保护作用）

4、戴上kouzhao及手套（有条件的**好戴上帽子，不过也没关系，我们实验室就没戴）

5、用70-75%的酒精擦试实验物品，然后拿入超净工作台中。

6、操作时注意以下几点：尽量在酒精灯火焰附近操作，但如果管子里有细胞就要离火焰有一定距离了，否则细胞要烫死了；不要重复使用移液管（即吸一次后，就换新的管）；不要在敞开的容器上方操作；手上的酒精不要擦太多，否则靠近酒精灯时容易把手烧到（我想很多人都有过被烧的经历吧）；

其实操作是很简单的，但一定要仔细。尤其是第2步许多人都不注意，细胞平时放在37℃培养，如果加入的PBS或胰酶温度太低，会对细胞有操伤的，虽然这种损伤短期内察觉不到，但时间长了，就会显现出来。