美国NOVABIOS恙虫病IgG抗体 ELISA检测试剂

美国NOVABIOS恙虫病IgG抗体 ELISA检测试剂

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【预期用途】

恙虫病IgG ELISA试剂盒可用来检测人是否感染恙虫病东方螺旋体（OT），它是检测血浆或血清中抗恙虫病东方螺旋体源性重组抗原的IgG抗体的一种ELISA检测系统。此实验可辅助诊断人是否感染了恙虫病东方螺旋体，此试剂盒不能用于筛查血液或血液成分，仅供体外诊断用。

【检测原理】

恙虫病IgG ELISA试剂盒是一种定量检测人血清和血浆中抗OT IgG抗体的酶免试剂。包被板的微孔中包被了重组抗原混合物（如下）。在检测的时候，血清应当用Inbios的样品稀释液稀释后再加入微孔中，具体请见如下的“血清应用范例”。在温育并洗板后，在微孔中加入HRP标记的IgG酶联物。温育并洗板，再向微孔中加入TMB底物液并温育。后再加入酸性终止液，并在450nm检测底物反应的程度。所检测到的OD值与样品中IgG抗体的浓度成正比。阴性质控和弱阳性质控以内在质控形式提供，其目的是为了监测试剂盒成分的完整性。如果样品与抗原间发生了反应，则样品应当被认为是阳性的。

【检测步骤】

将所有的试剂成分和样品都平衡至室温。实验前反复倒置以便试剂和样品混合均匀。阳性质控、阴性质控和未知血清都必须做双份检测。

1） 确定好所需检验的血清样品量。

2） 按照如下的“血清应用范例”组织血清样品（仅供参考，用户也可以自己设置相应的位置），用户可以杂试管或ELISA塑料板内稀释样品。

3） 用样品稀释液将样品稀释50倍（您可以在8ul的血清中加入392ul样品稀释液），混合。注意：血清和质控品不能低于4ul。

4） 用移液器将稀释好的血清和质控各50ul加入到相应的微孔中。

5） 用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所有板条的底部是没有覆盖的。

注意：这样是为了保证温度的分布在每个孔的底部和血缘相等地散播。一旦顶部密封阻碍了蒸发，任何多余的封板胶必需被剪掉。

6） 37℃下保湿温育板条30分钟，在温育器的底部放置水浴箱可达湿润的作用。注意：不要将微孔板叠放，必须单独地分层平辅。这对于温度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何气体，不要让板条接触任何湿润的物质，如湿纸巾等。

7） 温育后，用洗板机洗板6次，每次每孔300ul。

8） 在每一微孔中加入50ul即用型的酶联物。

9） 用封板胶仅在开放的微孔表面封板，所有板条的底部是没有覆盖的。（同步骤5）

10） 37℃下保湿温育板条30分钟。（同步骤6）

11） 温育后，用洗板机洗板6次，每次每孔300ul。

12） 用多道移液器在每一微孔中加入150ul Enwash溶液。

13） 室温温育5分钟。

14） 温育后，用洗板机洗板6次，每次每孔300ul。

15） 用多道移液器在每一微孔中加入75ul TMB底物液。

16） 室温避光温育10min。

17） 温育后，用多道移液器在每一微孔中加入50ul终止液，室温温育1min。

18） 温育后，450nm处测 OD值。

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