百日咳IgG抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）
1. 名称
通用名：百日咳 IgG试剂盒 (定量)     
英文名：Bordetella Pertussis IgG (quant.)
商品名：赛润ELISA classic 百日咳 IgG抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）
汉语拼音：Serion ELISA classic Bairike IgG kangti dingliang jiance shijihe (meilian mianyifa)   
2．用途
用于定量测定人血清、脑脊液或血浆中的抗百日咳杆菌抗体。
3. 诊断意义  
赛润ELISA classic 百日咳 IgG抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）用于定量检测人血清和血浆中抗百日咳杆菌的抗体。该试剂可用于百日咳急性感染或近期感染的诊断及流行病学研究，IgG-ELISA试剂则用于监控疫苗的接种情况。 
 
对于IgM抗体的检测，百日咳细胞表面的脂多糖具有明显的诊断学特征，而PT和FHA在这里并不适用6，因此利用赛润ELISA classic百日咳IgM试剂进行检测时，应使用百日咳的全细胞来制备抗原。  
 
百日咳血清学检测还不能代替作为最终诊断依据的病原体分离，它是对病原体分离检测的一个补充。 
 
其他细菌例如副百日咳、流感（嗜血）杆菌、粘膜炎莫拉菌、肺炎支原体、沙眼衣原体或某些病毒如呼吸道合胞体病毒和腺病毒等也能引起类似百日咳的病症。 
4. 说明
本说明书除百日咳IgG抗体定量检测的内容外，还涉及到IgM/IgA抗体的定量检测，以及对结果的分析等。
 
5. 赛润ELISA classic - 检验原理 
 
用抗原包被微量板孔，制成固相载体。加患者血清到板孔中，其所含的抗体特异性地与固相载体中现存抗原结合，形成免疫复合物。除去多余物质后，加入结合了碱性磷酸酶的IgG、IgA或IgM抗体，使之与上述免疫复合物反应。洗板，除去多余的结合物，加入底物（对硝基苯磷酸盐）。其与酶结合的免疫复合物反应，产生有颜色产物，颜色强度与特异性抗体含量成正比。 
 
 6. 试剂盒的组成 
 
试剂盒组成    IgG试剂盒  IgM试剂盒 IgA试剂盒  
数量 / 容积 
微孔条（此微孔条可拆下单独使用，每条有8孔，共96孔，已经包被了抗原） 
1个微孔条框架 
包被材料未被激活     12           12          12 
标准血清（立即可用） 
人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗HIV抗体、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗体均为阴性； 
防腐剂：< 0.1% 叠氮化呐  
染色剂：紫红色O     2×2毫升    2×2毫升   2×2毫升
阴性对照血清（立即可用） 
人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗HIV抗体、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗体均为阴性； 
防腐剂：< 0.1% 叠氮化呐  
染色剂：里沙明绿 V     1×2毫升    1×2毫升   1×2毫升
酶标记的抗人IgG, IgA, IgM （立即可用） 
羊抗人IgG, IgA, IgM（多克隆），标记碱性磷酸酶后在蛋白稳定剂中储存 
防腐剂: 0.01% 甲基异噻唑啉酮 
 0.01% 溴化硝基二垩烷     13毫升      13毫升      13毫升 
浓缩洗液（可稀释至1000毫升） 
氯化钠溶液，含吐温20和30mM Tris  
防腐剂： < 0.1%叠氮化呐     1×33.3毫升1×33.3毫升 1×33.3毫升 
稀释缓冲液 
磷酸盐缓冲液，内含蛋白和吐温20 
防腐剂： < 0.1%叠氮化呐 
0.01克 /升的溴酚蓝钠盐     2×50毫升    2×50毫升  2×50毫升
终止液 
1.2N 氢氧化钠     15毫升      15毫升      15毫升 
底物（立即可用） 
对硝基苯磷酸盐，不含其它溶剂的缓冲液 
防腐剂：< 0.1% 叠氮化呐 
（未开封瓶子中的底物可能会轻微变黄，但不会影响其质量）     13毫升      13毫升      13毫升 
带有标准曲线和评估表的质量控制文件 
（抗体以IU/毫升或U/毫升计量）     1             1           1 
7. 其它检测所需物质 
 
-  普通实验室所需的仪器装置 
-  IgM检测: 另需赛润含对照抗原的赛润类风湿因子Rf -吸附剂（产品编号Z100/5ml和Z200/20ml）  
-  分光光度计，波长405纳米，建议参考波长范围620纳米- 690纳米（例如 650纳米） 
-  37℃温箱 
-  湿盒 
-  蒸馏水。 
 
8. 储存及稳定性 
有效期内
9. 赛润 ELISA classic的检验步骤 
9.1 注意事项 
 
只有全部使用赛润 ELISA classic试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。尤其是标准血清，对照血清以及酶标记物，必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。稀释缓冲液，洗液，终止液和底物溶液可用于所有赛润 ELISA classic试剂盒。 
 
ELISA classic试剂盒内所有试剂均必须正确地存放。应在未开封的情况下，保存于2-8℃，并在有效期（见标签说明）内使用。详细的稳定性和储存资料在“8. 储存及稳定性”内将加以详述。 
 
每一种试剂都是经过校准以保证优的检测结果。这些试剂如果未经规定被稀释或改动都会导致检测的敏感性的降低。 
 
在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。 
 
请从标记处剪开密封袋。如果铝袋破损或者开启装有干燥剂的铝袋后而未以夹子封紧的，则不要继续使用微孔条。 
 
开始试验前，将所有试剂置于室温。 
 
从试剂管中吸取试剂的时候，应注意使用无菌技术以防污染。为避免假阳性结果，吸加酶结合物时，吸嘴应确保不接触或喷洒于小孔的外面，注意不要盖错瓶盖或管盖。 
 
试验结果的可重复性依赖于充分混匀试剂。使用前振荡装有对照血清的小管和所有稀释过的溶液（例如使用混合器）。 
 
小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 对照血清，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。 
只有严格遵守赛润ELISA classic试剂的试验说明才会得到优的检测结果。 
 
如果实验中未严格遵守控制质量控制认证文件上的有效性特异准则，则试验结果无效。 
 
洗涤不充分将影响试验结果： 
 
应该小心进行洗涤。洗涤步骤应遵守相关洗涤器（平底孔，孔直径7毫米，深10.9毫米）指导手册进行。重要的是所有的孔内均应加入相同体积的洗涤缓冲液。洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液。避免产生泡沫！如果使用自动洗板机，注意正确操作。 
 
9.2 检验前的准备工作和储存 
避免使用高血脂、溶血或黄疸的标本，尽管在我们的检测中没有发现有副影响。明显被污染的标本（血清或血浆）不能用于检测。 
样品不应加热灭活。 
 
9.2.1 样品准备 
开始试验前，患者的待测样品必须以稀释缓冲液稀释如下（V1+V2）： 
 
V1+V2=1+100       加    10微升   患者待测样品 
                   于   1000微升   稀释缓冲液 
稀释后及加入微孔板前，样品必须充分混匀。