单B细胞筛选技术服务:
单个B细胞抗体技术作为新一代抗体开发技术,可以从单个B细胞中高效、快速的分离抗体,是继杂交瘤、噬菌体展示后又一抗体产生技术的突破。可利用单B细胞筛选技术制备兔、鼠、驼、羊、鸡等多物种的单克隆抗体,单B细胞技术具有高特异性、高活性和高亲和力等突出优势,卡梅德科技基于单B细胞筛选平台,从筛选时间到获得高质量的抗体均有优势,可提供从抗原设计、合成与修饰到动物免疫、单B细胞富集筛选,表达与纯化,功能验证等一站式技术服务,满足客户不同的需求。
卡梅德科技(KMD Bioscience) 基于单B细胞筛选平台提供相应的不同物种的抗体制备服务,并且可通过抗体测序,获得序列信息一站式的服务也为客户提供更优质的选择,满足您的需要,配合抗体生产平台、抗体发现平台等助您快速获得高质量的抗体。
单B细胞筛选技术服务流程:
1)单个B细胞的分离
单B细胞可以通过随机分离和抗原特异性分离两种方式,从外周血或淋巴组织中提取。随机B细胞分离可采用显微操作、激光捕获显微切割或荧光激活细胞分选(FACS)等技术进行筛选。抗原特异性分离则可以使用抗原包被的磁珠、荧光标记抗原的多参数FACS、溶血斑块实验或荧光焦点法来筛选特异性B细胞。利用FACS技术,研究人员能够根据特定细胞表面标志物的表达模式,清晰区分待分选B细胞的发育和分化阶段,几乎可以从任何阶段的B细胞中进行分选。为确保获得特异性抗体,需在单细胞分离前评估供体的免疫应答,例如通过酶联免疫斑点技术(ELISPOT)测定外周血中抗体特异性细胞(ASC)的丰度,从而选择含有较高抗原特异性抗体浓度的血样进行后续制备。
2)单B细胞抗体的测序和克隆
单细胞的cDNA合成通常在96孔板上进行。全长免疫球蛋白(Ig)基因的转录产物通过巢式或半巢式RT-PCR扩增。对于抗体重链和轻链的可变区,设计前向引物的混合物,而反向引物则特异性互补于抗体的恒定区。在某些情况下,如果需要分离和扩增不同同种型的抗体,反向引物将是特异性互补于各类同种型抗体恒定区的混合物。扩增后的基因可直接转染至哺乳动物细胞中,以实现单克隆抗体的体外表达。
3)抗体的表达和筛选
在鉴定抗体或抗体片段的抗原特异性和生物活性之前,需要将携带抗体基因的表达载体在适当的系统中进行表达。常见的表达系统是原核系统(如大肠杆菌),而哺乳动物细胞系统(如HEK 293或CHO细胞)则更适合进行抗体的翻译后修饰,主要采用瞬时表达或稳定表达。在大肠杆菌中,通常抗体基因以抗原结合片段(Fab)的形式表达,而在哺乳动物细胞中,则以完整的IgG形式进行表达。通过这一系列步骤,研究人员能够高效获得特异性抗体,为后续的应用提供支持。