胶原蛋白是一种在皮肤、骨骼及肌腱中广泛存在的结构蛋白，其基本单位由三条多肽链组成，形成稳定的三股螺旋结构。这种结构使得胶原蛋白在组织修复、组织工程及美容保健等领域发挥着重要作用。

天然胶原蛋白主要通过物理、化学或酶解等方法从动物组织（如皮肤、骨骼）中提取。常见的纯化方式包括：

• 酶解法：将动物组织（如皮肤、骨骼等）清洁和切片、粉碎后，用特定蛋白酶进行酶解，再通过离心、过滤、浓缩换液等步骤分离出胶原蛋白。

然而，随着质量标准的提高，通过传统方法天然提取的胶原蛋白面临着杂质（如内毒素）的控制难题，这为后续的纯化工艺提出了更高的要求。博格隆的阴离子交换层析介质可用于纯化，以生产更高纯度的胶原蛋白。

重组胶原蛋白是通过基因工程技术生产的胶原蛋白，避免了动物源胶原蛋白的质量波动和安全隐患。

重组胶原蛋白的生产体系主要包括大肠杆菌、酵母等表达系统，具有产率高、成本低、周期短等优势。其工艺路线包括发酵表达、盐析、固液分离、澄清、亲和层析、离子交换和多模式层析等纯化步骤。

Fig.1 分离纯化流程

胶原蛋白的纯化工艺应根据表达系统和应用需求选择。若在构建时设计了标签，可采用亲和层析进行高效纯化；若无标签，则可根据胶原蛋白与杂蛋白的电荷、疏水性及分子大小等差异，选择离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析等方式，或通过复合模式层析进一步提高纯度。这些方法可灵活调整，以满足不同的应用和纯度需求。

亲和层析是一种基于特异性结合的分离方法，常用于重组胶原蛋白的初步纯化。通过在表达的胶原蛋白中插入标签，如His标签，对目标蛋白进行特异性结合捕获。

Ni²⁺对His标签具有特异性亲和，可以使用博格隆Ni Bestarose FF或Ni Bestarose HP等已鳌合金属离子的亲和填料进行捕获，通常一步可达到80%以上的纯度，杂质去除效果好。随后，再使用分子筛进行精纯以及浓缩换液，得到胶原蛋白原液。

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