一.操作步骤

1.过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。

2.对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

3.打开 HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪 )，连接好流动相管道，连接检测系统。

4.进入 HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

5.有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在 manual 菜单下，先点击 purge，再点击 start，冲洗时速度不要超过10ml/min。

6.调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。

7.设计走样方法。点击file，选取 select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击 new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等根据需要而不同。选完后，点击 protocol。一个完整的走样方法需要包括:a.进样前的稳流，一般2-5分钟;b.基线归零;c进样阀的 loading-inject 转换;d.走样时间，随不同的样品而不同。

8.进样和进样后操作。选定走样方法，点击 start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击 postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

9.关机时，先关计算机，再关液相色谱。

10. 填写登记本，由负责人签字。

二.注意事项

（1）流动相均需色谱纯度，水用 20M 的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡

（2）柱子是非常脆弱的，次做的方法，先不要让液体过柱子

（3）所有过柱子的液体均需严格的过滤

（4）压力不能太大，不要超过 2000 psi

1.使用”保护柱”，能够延长色谱柱的使用寿命。简单的说，保护柱”即是很短的色谱柱，填装和所使用液相色谱柱相同的填料。正确使用装在液相色谱柱前面的”保护柱”，可以阻拦一些容易损坏液相色谱柱的物质。而达到延长柱子寿命的效果。如果使用”保护柱”不当。会造成反效果.因为在保护柱使用过程中。如污染达到一定程度而没有及时更换，累积的杂物很可能会冲入色谱柱中，反而会造成色谱柱损坏。因此。使用”保护柱”时，最重要的是要知道什么时候该换保护柱该换的时候就必须要立即更换。

2.选择高品质的柱子，并注意使用方法，可以延长柱子的使用寿命。一般认为同一厂牌、同一型号的柱子之间的品质都相同，对品质管理很严格的厂家而言，这说法是成立的。但如果厂家品质管理不够严格，即使是同一批号的新柱子之间的品质也有差异。所以，选用柱子时必须选择管理严格的高品质柱子，我们知道，任何柱子使用过后都会产生变化。尤其如在强酸或强碱条件下使用柱子更易产生变化。因此，应尽量选用 pH 适用范围大的柱子。在开发新分析方法时，许多专家建议不要使用旧柱子。因柱子一经使用。柱性会改变;如此一来，使用旧柱子开发出来的新分析方法很可能在再使用同厂牌的新柱子分析时。发生无法达到预定效果的情况。总的说。开发新分析方法时要使用品质好的新柱子;并且一支柱子使用在一种分析方法上，则柱子寿命可以延长

3.定期冲洗柱子可以延长柱子使用寿命。我们知道柱子使用一段时间后总会有一些杂质累积在柱内。这些杂质不会随着流动相出来，自然会逐渐影响柱子的品质。这些杂质在后来的分析谱图上出现。而造成出现怪峰、基线不平等现象。简单的解决方法是用较强的流动相冲洗。是在每次分析某一产品完成后冲洗。如果分析时使用缓冲剂时·用水来取代缓冲剂。先使用有机和水的混合溶液为流动相冲洗缓冲剂。接着再用 99%有机溶剂冲洗。如果不先用有机和水的混合溶液冲洗，而直接用 99%有机溶剂冲洗的话，缓冲剂很可能会沉淀出来，而损坏柱子的品质。使用 10-20倍柱体积的量来冲洗基本就足够了。专家建议将 99%有机溶剂冲洗的条件加在分析实验程序完毕地最后，如此一来每天在开机前都会用 99%机溶剂冲洗。一般硅胶柱可以反冲洗处理，即是在将冲洗前将柱子倒反接后再冲洗。打算使用反冲洗处理前，先参考柱子的保养说明书。所以要真正保护柱子，使柱子的寿命延长，是使用”保护柱”和定期冲洗柱子