间充质干细胞微载体/片状载体培养细胞计数解决方案
时间：2024-10-10 阅读：910
间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSC)是一类多能干细胞，能够分化为多种细胞类型，有很强的自我更新能力，具有免疫调节功能，且能分泌多种生物活性因子促进组织修复和再生。因此，MSC在再生医学、组织工程、免疫调节、药物筛选等方面有着广泛的应用潜力。
MSC属于贴壁依赖的细胞，通常需要附着在培养表面才能保持干性以及有效增殖和生长。为了进一步发挥MSC的功能，通常会利用微载体或者片状载体进行大规模培养。在MSC的微载体/片状载体培养过程中，常规使用的是胰酶消化后的细胞悬液进行细胞计数，观察MSC细胞浓度变化和活率变化，但也面临一些问题：
胰酶消化微载体上的细胞，往往不能完全消化；
胰酶过度消化也容易造成细胞损伤，活性下降。
艾贝泰Countleader®双荧光细胞计数仪，搭配艾贝泰自产细胞裂解液A+B液，可很好的解决胰酶消化操作复杂、结果准确性低的问题。
MSC微载体培养计数方法
首先将培养的MSC样本分为两份：
一份样本中按等体积加入Reagent A100 裂解缓冲液处理微载体悬浮培养物，裂解缓冲液使细胞质膜通透并从微载体上释放细胞核。然后用等体积的Reagent B稳定细胞核，形成稳定的细胞核悬液(样品1)，取样品1与AOPI染料1:1 混合，吸取15μL 染色后的细胞样品加入到FL8-slides耗材的待测通道中(通道1)。
另外一份样本(样品2)同时与AOPI染料1:1 混合， 吸取15μL染色后的细胞样品加入到FL8-slides耗材的待测通道中(通道2)。
Countleader® FL 1000细胞计数仪内置“Viability and Cell Count Assay A100 And B”分析方法。通道1获得总细胞浓度，通道2获得死细胞浓度。
|
|
|
PI能够与死细胞、细胞裂解后的细胞核染色，呈现红色荧光。无需手动计算，设备软件自行运算，直接快速、准确的获得微载体培养MSC的活细胞浓度以及活率。
|
|
|
| 通道1：总细胞核图像 | 通道2：死细胞核图像 |
MSC片状载体培养计数方法
收集2-3个片状载体至50 mL离心管中，加入适量体积(淹没整个片状载体为准)的Reagent A100 裂解缓冲液，裂解10 min(按照不同载体材质，裂解时间可分别设置5 min、10 min、15 min、20 min等，如果延长时间后，细胞数量没有显著增加，可以确定最佳孵育时间)，加入等体积的Reagent B 稳定细胞核，混合均匀。
取裂解完毕后的混合液与AOPI染料1:1 混合,吸取15μL 染色后的细胞样品加入到FL8-slides耗材的待测通道中。Countleader® FL 1000细胞计数仪内置“Viability and Cell Count Assay (AOPI)”分析方法，设置样本名称、视野面积以及稀释倍数。PI能够与细胞裂解后的细胞核染色，呈现红色荧光。
·裂解后细胞核图片·
细胞计数结果：片载体细胞浓度（cells/cm2）=
注：艾贝泰提供的Reagent A100和Reagent B也可用于结团细胞的裂解计数，精确获得结团细胞的计数结果。
Countleader® FL 1000细胞计数仪，具备台盼蓝、AOPI双荧光双分析模式，8通道耗材，操作简单，重复性好，符合FDA的21 CFR Part11的要求！
|
|
|
Countleader® 系列细胞计数仪，可以满足您的不同需求！
· 关于艾贝泰 ·
艾贝泰生物科技有限公司(Applitech Biological Technology Co., Ltd.)作为一家集设计、研发、生产、销售和服务于一体的高新技术企业，致力于为生物制药领域提供专业的生产及分析设备、一次性耗材和整体解决方案。从成立至今，我们始终以客户为中心，将“质量为本，服务为先”作为经营方针，立足于生物工艺的优化、放大和生产，不断完善生物制药领域的产品线，为用户提供全方位生物工艺的专业解决方案，助力用户在生物制药领域不断取得新的突破。
艾贝泰深耕生物反应器领域将近20年，立志打造高端自主生物反应器。我们的生物反应器覆盖从研发、中试以及cGMP生产多 领域，广泛应用于抗体、疫苗、细胞治疗、基因治疗以及干细胞治疗等领域的研发及生产。以生物反应器为业务核心，我们逐步形成涵盖过程检测、光谱分析、细胞分析、在线取样、样品处理等的产品布局，为国内外生物制药企业提供了广泛的产品与技术服务。
艾贝泰的销售及售后服务网络遍布全国，总部位于广州，在上海、北京设立分公司及产品展示及应用中心，在成都、西安等地设立办事处，在天津、苏州、杭州、武汉、南京、兰州、长春、青岛等地设置服务点。艾贝泰秉承“技术专业、服务周到、行动快速”的服务宗旨，以客户为导向，与技术伙伴紧密合作，共同为生物制药产业的发展保驾护航！