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纯化小技巧 | 带状疱疹疫苗常用填料分享

时间:2024-04-11      阅读:1558

 

 

带状疱疹是由水痘——带状疱疹病毒
 
(varicella-zoster virus,VZV)
 
引起的一种感染性疾病。
 

 

 
  对于该感染性疾病,医学上尚无特效药,对其进行预防接种疫苗则成为目前有效、经济的手段。当今带状疱疹疫苗的研发工艺路径主要分为三种类型:减毒活疫苗、基因工程重组疫苗及mRNA疫苗。目前,全球销售规模较大的疫苗则主要以重组带状疱疹疫苗为主。

 

 
  重组带状疱疹疫苗层析纯化工艺路线  
 

 

 
  阴离子捕获——MaXtar® Q  
 
  在捕获阶段选择阴离子交换层析介质,可以去除一大部分HCP和杂质蛋白,更大程度获取目的物。百林科MaXtar® Q强阴离子交换层析介质,其基架具有更强刚性,在较低的反压下能够实现更高工艺流速,提高工艺效率;配基偶联方式的升级,可以有效提高层析介质的动态结合载量。
 
 MaXtar® Q能有效捕获目的蛋白
 
  MaXtar® Q纯化重组带状疱疹疫苗发酵液上清,能有效捕获高纯度目的蛋白。
 
  层析柱:Chrom-LinX® 26/400,柱高20 cm
 
  样品:重组带状疱疹疫苗发酵液上清
 
  Buffer A:20mM PB,pH6.8
 
  Buffer B:20mM PB,1M NaCl,pH6.8
 
  流速:120 cm/h

图1 MaXtar® Q纯化带状疱疹疫苗层析图谱

 
  针对MaXtar® Q纯化层析介质,百林科也对其在耐酸碱盐条件下的使用寿命做了一定研究。通过模拟CIP条件(1M HAc+1M NaCl,1M NaOH),进行150个循环后,我们发现,MaXtar® Q的动态结合载量没有明显差异。

图2 不同循环测试MaXtar® Q的动态结合载量表现

 
  疏水中度纯化——Phenyl Chromstar® HP  
 
  中度纯化阶段选择疏水相互作用层析介质,去除样品中的主要杂质,并进一步去除HCP。百林科的Phenyl Chromstar® HP采用细粒径设计,分辨率提高。
 
Phenyl Chromstar® HP分辨率高
 
  带状疱疹疫苗经Phenyl Chromstar® HP疏水层析介质纯化后纯度可达98%。
 
  层析柱:Chrom-LinX® 26/200,柱高15 cm
 
  样品:Maxtar® Q洗脱收集液(加入硫酸铵至电导为98-105 mS/cm)
 
  Buffer A:0.6M (NH4)2SO4·PBS
 
  Buffer B:纯化水
 
  流速:120 cm/h

图3 Phenyl Chromstar® HP纯化带状疱疹疫苗层析图谱

 

图4 Phenyl Chromstar® HP纯化后
带状疱疹疫苗HPLC-SEC图

 
  阳离子精纯——MaXtar® SP HR  
 
  精纯阶段选择阳离子交换层析介质,经合适的纯化条件,采用流穿模式,使内毒素、HCD、HCP等痕量杂质结合,目的蛋白流穿。百林科的MaXtar® SP HR在有效去除HCP和HCD杂质的情况下,具有优异的放大生产性能,其基架具有更强刚性,因此在较低的反压下能够实现更高工艺流速,提高工艺效率;配基偶联方式的升级,可以有效提高层析介质的动态结合载量;具有更细的颗粒粒径,有效提高层析介质的分辨率。
 
MaXtar® SP HR能有效去除HCP和HCD杂质
 
  经MaXtar® SP HR纯化后,HCP和HCD均符合质量要求。
 
  层析柱:Chrom-LinX® 26/200,柱高10 cm
 
  样品:超滤后收集液
 
  Buffer A:20mM PB,pH5.8
 
  Buffer B:20mM PB,1M NaCl,pH5.8
 
  流速:60 cm/h

图3 MaXtar® SP HR纯化带状疱疹疫苗层析图谱

 

表1 MaXtar® SP HR纯化前后HCP和HCD结果对比

 
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