纯化小技巧|疏水层析效果与温度有关吗?
时间:2023-11-09 阅读:2061
立冬时节,虽然天气渐冷,然而实验人员火热的工作热情却丝毫未减。最近常听到实验人员各种各样的抱怨:怎么最近做的疏水层析结果不如之前的好了?怎么重复不出来之前的结果了呢?今日的疏水小课堂可以救急哈。
在前期的纯化小技巧中,我们就提到过去除抗体变体的有效手段--疏水层析介质。疏水层析介质对样品和杂质的分离主要基于层析介质的疏水性、被分离物质的性质和组成、表面暴露的疏水性基团的分布和结合缓冲液中盐的类型及浓度等。
影响疏水层析介质纯化效果的主要因素有:层析介质的性质(基架类型、结构、配基密度等),缓冲液的组成(平衡和洗脱缓冲液中盐的类型、浓度、pH值、温度),料液的性质和样品的其他成分等。
那我们想到,在这些影响因素中,实验人员在重复疏水层析的时候,是不是忽略了其中的哪个呢?考虑到最近的降温,我们第一个想到的就是温度。
通常情况下,温度对层析过程的影响比较复杂,蛋白质与疏水层析介质的结合是熵驱动的。故而,当温度降低的时候,蛋白质与层析介质的相互作用会降低,范德华力也降低。
百林科可以提供包括MaXtar基架和Chromstar基架在内的不同粒径的疏水层析介质。针对不同的实验需求,也有丁基Butyl、辛基Octyl、苯基Phenyl等不同疏水性配基的搭配。
鉴于温度会影响疏水相互作用,在下游纯化工艺开发及后续放大生产中,应当充分考虑样品温度的一致性:在研发阶段,当上样量比较小时,样品从冷冻状态取出,仅需很短时间即可恢复至室温;而上到大规模生产时,样品则需要更长的时间才可复温。
应用案例
疏水层析介质纯化双抗案例
填料: Butyl Chromstar HP
层析柱:Chrom-Screen 4.7ml;10cm
样品:双抗样品(调节电导至130mS/cm),样品温度25℃
平衡液:20 mM Tris, 1 M (NH4)2SO4, pH 7.4
洗脱液:20 mM Tris, pH 7.4
保留时间:5min
图1 层析图谱
图2 纯化前后SEC-HPLC检测图谱(左图:纯化前;右图:纯化后)
小结:由层析图谱和SEC检测图谱可以看出,Butyl Chromstar HP可将样品纯度由95.41%提升至98.8%,聚体含量则由4.59%下降至1.20%。
订货信息
欢迎联系当地销售和技术人员。
百林科多种层析填料
均可申请试用,
扫描立刻申请样品
Bio-Link