纯化小技巧｜疏水层析效果与温度有关吗？
时间：2023-11-09 阅读：999
立冬时节，虽然天气渐冷，然而实验人员火热的工作热情却丝毫未减。最近常听到实验人员各种各样的抱怨：怎么最近做的疏水层析结果不如之前的好了？怎么重复不出来之前的结果了呢？今日的疏水小课堂可以救急哈。
在前期的纯化小技巧中，我们就提到过去除抗体变体的有效手段--疏水层析介质。疏水层析介质对样品和杂质的分离主要基于层析介质的疏水性、被分离物质的性质和组成、表面暴露的疏水性基团的分布和结合缓冲液中盐的类型及浓度等。
影响疏水层析介质纯化效果的主要因素有：层析介质的性质(基架类型、结构、配基密度等)，缓冲液的组成(平衡和洗脱缓冲液中盐的类型、浓度、pH值、温度)，料液的性质和样品的其他成分等。
那我们想到，在这些影响因素中，实验人员在重复疏水层析的时候，是不是忽略了其中的哪个呢？考虑到最近的降温，我们第一个想到的就是温度。
通常情况下，温度对层析过程的影响比较复杂，蛋白质与疏水层析介质的结合是熵驱动的。故而，当温度降低的时候，蛋白质与层析介质的相互作用会降低，范德华力也降低。
百林科可以提供包括MaXtar基架和Chromstar基架在内的不同粒径的疏水层析介质。针对不同的实验需求，也有丁基Butyl、辛基Octyl、苯基Phenyl等不同疏水性配基的搭配。
鉴于温度会影响疏水相互作用，在下游纯化工艺开发及后续放大生产中，应当充分考虑样品温度的一致性：在研发阶段，当上样量比较小时，样品从冷冻状态取出，仅需很短时间即可恢复至室温；而上到大规模生产时，样品则需要更长的时间才可复温。
应用案例
疏水层析介质纯化双抗案例
填料： Butyl Chromstar HP
层析柱：Chrom-Screen 4.7ml；10cm
样品：双抗样品(调节电导至130mS/cm)，样品温度25℃
平衡液：20 mM Tris, 1 M (NH4)2SO4, pH 7.4
洗脱液：20 mM Tris, pH 7.4
保留时间：5min
图1 层析图谱
图2 纯化前后SEC-HPLC检测图谱(左图：纯化前；右图：纯化后)
小结：由层析图谱和SEC检测图谱可以看出，Butyl Chromstar HP可将样品纯度由95.41%提升至98.8%，聚体含量则由4.59%下降至1.20%。
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