纯化小技巧| 巧妙应对抗体变体，疏水层析介质来帮忙
时间：2023-08-10 阅读：906
提到抗体项目的开发，最令研发人员“头秃”的，莫过于目标产物变体(例如聚体和片段)去除，真是一不小心就容易“踩雷”。今天就给大家推荐一款“神器”--疏水层析介质。
通常情况下，目标产物变体(例如聚体和片段)去除的难点，往往在于其与目标产物性质的相似性，例如等电点相近，表面电荷差异小等等，这也给纯化蛋白带来不小的挑战。
疏水作用，主要是利用分子表面的疏水性的差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种层析方法。在疏水层析介质的配基中，丁基Butyl -辛基Octyl -苯基Phenyl的疏水性在依次增加。通常，目标蛋白会在高盐体系下与疏水性填料进行结合，在低盐条件下进行洗脱；依照待分离物质疏水性强弱，调节上样盐浓度，达到依次洗脱的效果。
疏水层析示意图
百林科可以提供包括MaXtar基架，MaXtar HR基架，Chromstar FF基架，Chromstar HP基架的不同疏水层析介质。其中，
MaXtar基架层析介质的平均粒径是75μm，
MaXtar HR基架层析介质的平均粒径是40μm，
Chromstar FF基架层析介质的平均粒径是90μm，
Chromstar HP基架层析介质的平均粒径是34μm。
应用案例 1
层析图谱
✦ 层析柱：Chrom-Screen MaXtar Phenyl HR 4.7ml；10 cm
✦ 平衡液：20 mM Tris, 1 M (NH4)2SO4, pH 7.4
✦ 上样：客户样品(调节电导至130 mS/cm)，载量30 mg/ml
✦ 洗脱液：20 mM Tris, pH 7.4
✦ 保留时间：5 min
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纯化前后SEC-HPLC检测图谱
(左图：纯化前；右图：纯化后)
(左图：纯化前；右图：纯化后)
小结：实验图谱和SEC-HPLC检测图谱分析得出，MaXtar Phenyl HR可将该样品纯度由95.41%提升至99.40%以上，聚体含量则由4.59%下降至0.60%，由此可见，MaXtar Phenyl HR对双抗聚体去除效果明显。
应用案例 2
层析图谱
✦ 填料： Butyl Chromstar HP
✦ 层析柱：Chrom-Screen 4.7ml；10cm
✦ 样品：双抗样品(调节电导至130mS/cm)
✦ 平衡液：20 mM Tris, 1 M (NH4)2SO4, pH 7.4
✦ 洗脱液：20 mM Tris, pH 7.4
✦ 保留时间：5min
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纯化前后SEC-HPLC检测图谱
(左图：纯化前；右图：纯化后)
(左图：纯化前；右图：纯化后)
小结：由层析图谱和SEC检测图谱可以看出，Butyl Chromstar HP可将样品纯度由95.41%提升至98.8%，聚体含量则由4.59%下降至1.20%，去除聚体效果明显。
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