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亲和层析填料有良好的耐碱清洗性能

时间:2022-10-24      阅读:328

  亲和层析填料是利用生物大分子与某些相对应的专一分子特异识别和可逆结合的特性而建立起来的一种分离生物大分子的层析方法。亲和层析是分离蛋白质的一种及有效的方法,常只需一步处理即可得到纯度较高的某种蛋白质。它是根据不同蛋白质对特定配体的特异而非共价结合的能力不同进行蛋白质分离的一种层析方法。
  亲和层析填料特性:
  1.对抗体有高度结合力
  2.极低的ProteinA流失率
  3.良好的耐碱清洗性
  4.好的耐蛋白酶降解能力
  5.高批间重复性
  6.高蛋白质回收率,并保持样品生物活性
  亲和层析填料是根据目标蛋白和层析基质上的特定配基发生可逆性地相互作用而进行分离的一种技术。这种相互作用既可以是特异性的(如抗体与proteinA或proteinG的结合),也可以是非特异性的(如组氨酸标签蛋白与金属离子的结合)。
  有很多种类型的生物学相互作用应用于亲和层析中,如配体-底物、蛋白-蛋白、核酸-蛋白等。亲和层析过程一般包括平衡、上样、清洗、洗脱四个阶段。平衡主要是将柱子平衡至有利于样品与填料配基结合的环境下,然后进行上样。洗脱可以是特异性的(如竞争性配基分子),也可以是非特异性的(如改变pH或离子强度)。亲和层析具有高选择性优势,通常一步亲和层析就可以获得高纯度的产品。但需要更高的纯度时,需要添加一步或多步纯化步骤,比如使用凝胶过滤层析进行/后的精纯。
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