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【一般贮存】必须防潮、避光、阴凉处保存
【组织培养基贮存】较长时间的贮存,必须放在2~6℃的冰箱内
【注意事项】:由于液体培养基不易*保管,现在均改制成粉末。
【贮存方法】:培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的贮存,必须放在2~6℃的冰箱内。由于液体培养基不易*保管,现在均改制成粉末。
【常见培养基有】:细菌培养基、放线菌培养基、微藻培养基、真菌培养基、食用菌菌种培养基、烟草的培养基、动物细胞培养基
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培养基是根据微生物生长繁殖的营养需要,用人工方法配置而成的培养基质,其中还有水、碳源、无机盐及各种生长因子,培养基可为微生物的生长提供能源、组成菌体的原料,调节代谢活动。
不同微生物对营养物质的要求各不相同,因此,配置培养基要根据微生物的营养特点。一般培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基,培养放线菌常用淀粉培养基,培养霉菌常用马铃薯培养基。
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1)母液配制必须严格分类
配制高浓度的母液是植物组织培养的基本功。配制母液的目的,除了多次取用、节省实验准备的时间外,还有抑制杂菌生长的作用。高浓度的母液能够有效地抑制细菌与霉菌的生长,加上低温环境 ( 4℃) ,能够大大增加培养基的存放时间( 一年左右 ) 。一般而言,培养基中的各个成分可以按照表1的分类方式配成母液。
伊红美蓝琼脂(EMB)4℃避光保存,用时按照母液倍数进行稀释即可。
母液分类的依据,是要避免MS培养基中某些成分发生沉淀反应。例如,如果将全部的大量元素混合在一起配制,则KH2PO4和CaCl2 易产生Ca3( PO4)2沉淀,而CaC12和MgSO4 将生成CaSO4 沉淀。
除上述成分外,还必须加上蔗糖、琼脂以及激素,才构成用于组织培养的MS培养基。
2)激素的溶解方法
MS培养基中常用的激素,如2,4 - D、NAA、6-BA,也要配制成 10~20倍母液,这样便于称量(激素的用量极小,给称量造成不便),且可以多次取用。激素的配制与一般的药品不同,需要助溶剂。
如要配制 10 mL的 1mg/mL 2,4- D母液,则应称取0.01g 2,4 - D固体,置于小烧杯中, 再以 1~3 mL的95%乙醇(或 0.1 mo l/L NaOH) 溶解,zui后缓慢加入蒸馏水定容。即每加入1 mL蒸馏水,立即搅拌均匀,使白色沉淀消失。重复数次,直至定容 。
一般而言,生长素类物质2,4-D、 N AA) 要用95%乙醇(或0.1 mo l/L NaOH)助溶,而细胞分裂素类物质(如6-BA)要用0.1 mo l/L的HC1助溶。助溶剂的用量一定要小,不能因其溶解效果好而过量使用,否则将影响培养基的质量(改变培养基成分或 pH值) 。配制好的激素要常温避光保存,尽快使用(尽量不超过一个月)。将激素母液保存在 4 ℃冰箱中, 希望获得较长的保存时间。但事实上这种做法是不可取的,因为激素在低温环境中易析出沉淀,影响使用效果
3)危险药品的使用与保管
尽管组织培养技术已经相当成熟,也很普及,但该技术并不安全。除注意灭菌锅、超净台等大型仪器的使用安全外 ,zui重要的当属危险药品的使用与保管。原则上,MS培养基中任何一种药品都有一定的危险性。现只把zui突出、zui需要预防的药品注释如下。
( 1 ) NH4NO3、 KNO3
此两种药品为易爆品,取用时一定要轻拿轻放,保存在阴凉处。另外,目前NH4NO3,的购买受到一定的限制,也可以考虑使用其他培养基,如N6或B5培养基,无 NH4 NO3成分,亦为组织培养所常用。
(2) EDTA- Na2 、CoC12、 2,4-D 此三种药品为致癌物,配制时要带胶皮手套,或两层塑料手套。EDTA-Na为金属螯合剂,有一定的粘性;CoCl2能够导致基因突变,遗传学实 验中也常用其作为致突变剂;2,4 - D是高效农药,对人的皮肤有伤害作用。
4)热水定容原则
在母液、激素、蔗糖、琼脂都加入后,很多人习惯用微波炉或电磁炉加热溶解培养基(特别是琼脂) 。培养基熔化后,由于水分的蒸发,会造成体积的减少,从而需要定容。这时一定要用热水( 60℃左右) 进行定容,切忌用冷水( 30℃以下),否则培养基中局部的琼脂将凝 固,造成营养成分浓度不均。
5)关于调节 p H
适合的p H保证了营养成分的正常发挥,也决定了培养基的硬度(偏酸则过软,偏碱则过硬,都不利于组织的生长) ,故要十分留意。对于MS 培养基而言,只要各个成分按照用量精确加入,并且在熔化培养基时加热时间适合( 平均100 mL培养基加热60~90s , 保证*熔化的同时,尽量限制加热时间) ,则培养基的pH自然地将处于zui适范围内。调解 pH时用电子pH计,以保证精确度。pH试纸的误差较大,要小心调节。可以将pH调到比zui适值小一些,因为培养基在灭菌后,p H将变大。