荧光定量PCR检测技术从诞生到现在已经有 8 年了，但是其应用在近四年才迅猛增长。在Medline 数据庫中，用“ Taqman” 或 ”real time PCR”作为关键词检索，在1996年仅有19篇，在1997年仅有28篇，在98 、 99 、2000 年分别达到了52 、157 、409篇， 2003年已经达到2984篇，相信在不久的将来会有更多的文章发表。针对实时 PCR 这一热点领域，
荧光定量PCR基本原理
• Taqman 技术：该技术以美国 ABI 公司为代表。 PCR 扩增时，在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收， PCR 仪检测不到荧光信号； PCR 扩增时（在延伸阶段）， Taq 酶的 5' － 3' 外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成*同步，这也是定量的基础所在。
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ABI公司
Taqman探针
MGB探针
Sybr green I染料
ROX染料
Taq酶（荧光定量PCR）
热启动酶
热启动荧光PCR定量核心试剂盒
一步法RT－PCR试剂盒
TrizolRNA提取试剂
UNG酶
标准品克隆
定点突变
亚克隆
dUTP
• Beacon 技术：该技术以美国人 Tagyi 为代表。也是加入了荧光探针，但它是 环状的寡核苷酸探针，分别由茎部和环部组成， 两端分别标记 荧光报告基团和荧光猝灭基团，在无靶序列的情况下，探针始终是环状，报告基团的荧光被猝灭基团猝灭，使荧光检测仪检测不到荧光信号；而在有靶序列时，即在 PCR 的退火阶段探针与靶序列结合，使荧光报告基团和猝灭基团分开，这样荧光仪可以检测到荧光，荧光信号的强弱代表了靶序列的多少。
