利什曼原虫黑热IgG抗体检测试剂盒说明书

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【检测原理】

利什曼原虫IgG/IgM抗体酶联免疫诊断试剂盒是间接法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知 LSM-Ab 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将 LSM-Ab 和生物标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物 A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中 LSM-Ab 的浓度呈比例关系。

【自备材料】

蒸馏水。

加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

振荡器及磁力搅拌器等。

【安全性】

避免直接接触终止液和底物 A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

【操作步骤】

使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。加入好后的标准品 50ul 于反应孔、加入待测样品 50ul 于反应孔内。立即加入 50ul 的生物标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育 1 小时。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入 80ul 的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育 30 分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入底物 A、B 各 50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育 10 分钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入 50ul 终止液，加入终止液后应立即测定结果。在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

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